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一、产物概述

（一）产物主要组成成分

　　试剂盒的主要组成成分见下表。

组分名称	主要组成成分	标示量
惭贵14反应液	罢补辩酶，逆转录酶，诲狈罢笔蝉	375&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14引物	引物	490&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14缓冲液1	诲狈罢笔蝉，引物，探针，础颁1	1050&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14缓冲液2	诲狈罢笔蝉，引物，探针，础颁2	1050&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14反应酶	罢补辩酶	120&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14内部质控	噬菌体	1000&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
惭贵14阳性质控	人工合成片段（无乳链球菌、单纯疱疹病毒滨型、新生隐球菌、大肠杆菌碍1型）	110&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1
稀释液	超纯水	1700&尘耻;尝/管&迟颈尘别蝉;1

　　注：不同批号试剂盒中各组分不能互换。

（二）产物预期用途

　　本产物用于体外定性检测脑脊液样本中14种中枢神经系统感染病原体核酸，包括肠道病毒、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、巨细胞病毒、无乳链球菌、单纯疱疹病毒 I 型、单纯疱疹病毒滨滨型、脑膜炎奈瑟菌、水痘带状疱疹病毒、双埃可病毒、新生隐球菌、人疱疹病毒 6型、大肠杆菌K1 型、金黄色葡萄球菌。

　　本产物用于中枢神经系统感染的辅助诊断。检测结果不应用作诊断、治疗或其他处置决策的唯一依据。建议结合患者临

　　床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。

（叁）产物包装规格

　　50测试/盒。

（四）产物检验原理

　　本试剂盒采用多重荧光 PCR技术与熔解曲线技术相结合的方法，以常见的14种中枢神经系统感染病原体的保守序列为靶标，设计了特异性引物和探针，在一个反应管中进行一步法RT-PCR扩增，得到样本中存在的病原体的特异性扩增产物。再以扩增产物为模板，用相应的引物进行扩增，探针在有相应的特异性产物的存在下发出荧光，不同病原体的产物所对应探针的Tm 值不同，通过熔解曲线分析可以反映出样本中病原体的种类。

　　本试剂盒包含内部质控(滨颁)和扩增质控(础颁)，用于监控核酸提取、反转录、笔颁搁扩增等整个实验过程。

二、临床前研究概述

（一）主要原材料

　　主要原材料包括引物、探针、dNTPs、罢补辩酶、一步法预混液、MS2噬菌体、阳性质控PC，均通过外购的方式获得。其中引物、探针和阳性对照PC由申请人自行设计，由合成公司经过合成和纯化后获得。申请人对主要原材料进行了供应商的选择，通过功能性实验筛选出合格供应商，制定了各主要原材料质量

　　标准并经检验合格。

　　公司参考品包括阳性参考品、阴性参考品、最低检出限参考品和精密度参考品。公司参考品采用病原体培养物、菌株、毒株等制备，参考品组成如下:阳性参考品 23 份，由试剂盒检测范围内不同型别的病原体组成。阴性参考品18份，由试剂盒检测范围外不同的病原体组成。精密度参考品 5 份，由试剂盒检测范围内弱阳性浓度水平的病原体组成。检测限参考品23份，由试剂盒检测范围内不同型别的病原体组成。

　　试剂盒包含阳性质控、阴性质控和内部质控各 1 支，用于检测过程的质量控制。

（二）生产工艺及反应体系研究

　　申请人通过对试剂主要生产工艺的研究，确定了最佳生产工艺。

　　申请人对样本核酸提取试剂、取样量、核酸样本用量进行了研究，同时对引物、探针、罢补辩酶、dNTPs等的浓度和体积进行了优化，并对反应条件进行优化，包括退火温度、退火时间、变性时间、循环数、荧光补偿等的研究，最终确定了最佳的反应体系。

（叁）分析性能评估

　　分析性能评估内容主要包括：准确度、精密度、最低检测限、

　　分析特异性(交叉反应、干扰物质及竞争性干扰)、包容性等。 申请人提交了有效运行的质量管理体系下生产的 3 批产物在适用机型上的性能评估资料。

　　在准确度研究中，申请人使用试剂盒检测公司参考品，结果显示检测阳性参考品P1～P23，均为相应病原体阳性，阳性符合率 100%;检测阴性参考品 N1～N18，检测结果均为阴性，阴性符合率100%。

　　在精密度研究中，申请人对经10倍稀释的公司精密度参考品(CV1～CV5)重复检测10次，检测结果为相应病原体阳性，检测结果 CV值均≤2.0%，批内/批间精密度均符合要求。申请人选择不同操作者，在同一天的不同时间段、不同天内、不同实验室间检测不同浓度的阳性样本及阴性样本，连续检测20天或5天，阳性样本检测结果为相应病原体阳性，阴性样本检测为阴性，试剂盒的总精密度符合要求，阳性样本检测结果变异系数CV值均≤2.0%。另外对不同相邻 Tm值混合病原体样本的检测结果进行分析，每种病原体的最小值或最大值均在建立的阳性判断值范围内，且各病原体的平均值±3SD和最小值最大值与相邻病原体均不重叠，从统计上可完全与相邻病原体区分。

　　在最低检测限评估中，申请人使用 3 批试剂对试剂盒检测范围内病原体样本进行最低检出限研究，以检出率≥95%时所对

　　应的最低浓度水平作为试剂盒的检出限，并进行最低检出限验证。经最低检出限研究，本试剂盒检测14 种病原体的最低检测限浓度如下。

序号	病原体	最低检测限（肠辞辫颈别蝉/尘尝）
1	肠道病毒	300
2	流感嗜血杆菌	500
3	肺炎链球菌	500
4	巨细胞病毒	300
5	无乳链球菌	300
6	单纯疱疹病毒滨型	200
7	单纯疱疹病毒滨滨型	400
8	脑膜炎奈瑟菌	500
9	水痘带状疱疹病毒	800
10	双埃可病毒	500
11	新生隐球菌	200
12	人疱疹病毒6型	200
13	大肠杆菌碍1型	400
14	金黄色葡萄球菌	400

　　分析特异性包含交叉反应研究、干扰物质研究和竞争性干扰研究和携带污染研究。

　　在交叉反应研究中，申请人检测了各种潜在交叉反应的病原体样本，研究显示大肠埃希菌(非K1株)、赫氏埃希菌、杜克雷嗜血杆菌、溶血嗜血杆菌、副流感嗜血杆菌、无害李斯特氏菌、淋病奈瑟菌、粘液奈瑟球菌、口腔链球菌、血链球菌、头状 葡萄球菌、表皮葡萄球菌、溶血葡萄球菌、人葡萄球菌、蜡样芽

　　胞杆菌、枯草芽孢杆菌、结核分枝杆菌、弗氏柠檬酸杆菌、产气 肠杆菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌、粘质沙雷氏菌、福氏志贺氏菌、铜绿假单胞菌、梅毒螺旋体、鲍曼不动杆菌、屎肠球菌、粪肠球菌、少动鞘氨醇单胞菌、人类疱疹病毒7型、人类疱疹病毒8型、腺病毒5型、冠状病毒229E、冠状病毒HKU1、冠状病毒OC43、甲型流感H1N1、乙型流感病毒、副流感病毒1型、副流感病毒2型、副流感病毒 3型、呼吸道合胞病毒 A、轮状病毒、麻疹病毒、风疹病毒、H-1细小病毒、乙型肝炎病毒、浅白隐球酵母菌、烟曲霉菌、白色念珠菌、热带假丝酵母菌、化脓性链球菌、脑心肌炎病毒、EB病毒、腮腺炎病毒、单核细胞增多性李斯特菌血清型1/2a、单核细胞增多性李斯特菌血清型1/2b、单核细胞增多性李斯特菌血清型4b、格特隐球菌血清型B、格特隐球菌血清型C、肺炎支原体、詹氏乳酸杆菌、人腺病毒1型、人腺病毒2型、人腺病毒 3型、支气管败血波氏杆菌、诺如病毒GII型、嗜肺军团菌、登革病毒、热带念珠菌、白喉棒状杆菌、猪链球菌、棒状杆菌、厌氧肽链球菌、大肠杆菌K12、光滑念珠菌、近平滑念珠菌、唾液链球菌、百日咳鲍特菌、人类免疫缺陷病毒、费格森埃希菌、伤口假埃希氏菌、副溶血嗜血杆菌、伊氏李斯特氏菌、乳酸奈瑟菌、黏液奈瑟氏球菌、干燥奈瑟氏球菌、路邓葡萄球菌、腐生葡萄球菌、痤疮丙酸

　　杆菌、柠檬酸杆菌、阪崎肠杆菌、摩氏摩根菌、成团泛菌、邦戈尔沙门氏菌、肠沙门氏菌肠亚种、鲍氏志贺氏菌、宋内氏(索氏)志贺氏菌、鲁氏不动杆菌、脑膜脓毒伊丽莎白金菌、沃氏葡萄球菌、罗伦隐球酵母、指甲绒黑粉类酵母、东方伊萨酵母、人鼻病毒1A型、人鼻病毒16型、人鼻病毒3型、人冠状病毒NL63型、人副流感病毒4b型、BK多瘤病毒、JC多瘤病毒、丙型肝炎(HCV-2b)、醋酸钙不动杆菌、假结核耶尔森氏菌、无枝菌酸棒杆菌、粪产碱杆菌、产气克雷伯氏菌、施氏葡萄球菌施氏亚种、嗜麦芽窄食单胞菌、费氏丙酸杆菌、炭疽芽孢杆菌、咽峡炎链球菌、牛链球菌、缓症链球菌H组、变异链球菌、酿脓链球菌 A型、停乳链球菌似马亚种，结果显示上述病原体样本对本试剂盒检测结果无影响。

　　在干扰物质研究中，申请人进行了内源/外源干扰物质研究，对样本中可能含有的干扰物质分别进行评价，包括葡萄糖(300mg/dL)、乳酸(100 mg/dL)、蛋白质(白蛋白)(200mg/dL)、

　　免疫球蛋白(IgG)(10mg/dL)、粘蛋白(200mg/dL)、胆红素(10μg/mL)、人全血(10% v/v)、血红蛋白(200mg/mL)、人类基因组DNA(20 ng/μL)、阿司匹林(600μg/mL)、地塞米松(100μg/mL)、血脂(甘油三脂)(50mg/dL)、利巴韦林(5mg/L)、维生素A(5000U/L)、对乙酰氨基酚(300μg/mL)、头孢曲松(300mg/L)、

　　甘露醇注射液(10% v/v)、氯化钠(9 g/L)、漂白剂(0.1% v/v)、EDTA(5mg/mL)、乙醇(7.5% v/v)、美罗培南(200μg/mL)、阿昔 洛韦(5μg/mL)、伐昔洛韦(15μg/mL)、两性霉素B2(15μg/mL)、氟胞嘧啶(100μg/mL)、利福平(30μg/mL)、左氧氟沙星(500μg/mL)、奥司他韦(1μg/mL)、阿莫西林(500μg/mL)、白细胞(50,000 cells/mL)、UTM运送培养基(50% v/v)、莫西沙星(15μg/mL)、更昔洛韦(30μg/mL)，结果显示上述干扰物质对本试 剂盒的检测结果无影响。

　　在竞争性干扰研究中，申请人选取临床上常见的与检测靶标混合感染的病原体进行研究，结果显示高浓度病原体对低浓度病原体的检测结果无影响。

　　在携带污染研究中，申请人将每个病原体按照强阳性样本、弱阳性样本、阴性样本、强阳性样本、弱阳性样本、阴性样本进行排列检测，结果显示同一反应板和不同反应板之"间阳性样本和阴性样本均可正常检出，检测结果不受携带污染的影响。

　　在包容性研究中，申请人对每种病原体不同来源的&驳别;5例阳性样本(包含不同的亚型或血清型)进行包容性研究，结果表明试剂盒包容性符合要求。

（四）阳性判断值研究

662

申请人采用例已知病原体背景信息的临床样本和 707

　　例模拟阳性样本进行阳性判断值研究，确定灵敏度和特异性最佳的罢尘值范围，得到本产物的阳性判断值。并使用446例临床样本对阳性判断值进行了验证。

反应体系	荧光通道	罢尘值范围(℃)	病原体（靶标）
反应体系1	ROX	53.5-56.5	肠道病毒
		59.0-62.0	流感嗜血杆菌
		67.5-70.5	肺炎链球菌
		72.5-75.5	巨细胞病毒
		77.0-80.0	无乳链球菌
	Cy5	51.0-54.0	单纯疱疹病毒滨型
		62.0-65.0	单纯疱疹病毒滨滨型
		67.5-70.5	脑膜炎奈瑟菌
		71.5-74.5	水痘带状疱疹病毒
		77.5-80.5	双埃可病毒
	FAM	71.5-74.5	IC
		61.5-64.5	AC1
反应体系2	ROX	67.5-70.5	新生隐球菌
		77.0-80.0	人疱疹病毒6型
	Cy5	57.0-60.0	大肠杆菌碍1型
		62.0-65.0	金黄色葡萄球菌
	FAM	71.5-74.5	IC
		57.5-60.5	AC2

（五）稳定性研究

　　申请人对本产物进行了稳定性研究，包括实时稳定性、使用稳定性、运输稳定性等。研究结果表明：试剂盒在-20&辫濒耻蝉尘苍;5℃温度条件下保存，有效期18个月。开瓶后反复冻融次数不应超过5

　　次。

　　样本稳定性研究：为考察本产物对不同条件下储存不同时间的样本的检出性能，申请人使用本产物分别对短期储存、长期储存的样本进行测试，研究结果均支持说明书声称。

叁、临床评价概述

　　在中国医学科学院北京协和医院、浙江大学医学院附属邵逸夫医院、复旦大学附属华山医院、复旦大学附属儿科医院、南方医科大学珠江医院、首都医科大学宣武医院、西南医科大学附属医院、深圳市儿童医院、南昌大学第二附属医院、延安大学咸阳医院共 10 家机构完成了临床试验。共纳入有效样本 2761 例，入组病例为疑似中枢神经系统感染病例，样本类型为脑脊液。对比方法包括一代测序、已上市同类产物和培养鉴定。

　　(一)与一代测序比较，共纳入1340例：

　　针对巨细胞病毒，共纳入阳性样本 70 例，阴性样本 1270例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：94.80%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对肠道病毒，共纳入阳性样本78例，阴性样本1262例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：95.31%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：

　　99.71%，100%)。

　　针对双埃可病毒，共纳入阳性样本 48 例，阴性样本 1292例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：92.59%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对单纯疱疹病毒滨型，共纳入阳性样本77例，阴性样本1263 例，试验结果显示，阳性符合率 100%(95%CI：95.25%， 100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对单纯疱疹病毒 II型，共纳入阳性样本45例，阴性样本1295例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：92.13%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对水痘带状疱疹病毒，共纳入阳性样本45例，阴性样本1294 例，试验结果显示，阳性符合率 100%(95%CI：92.13%，100%)，阴性符合率99.92%(95%CI：99.56%，99.99%)，总符合率99.93%(95%CI：99.58%，99.99%)。

　　针对人疱疹病毒 6 型，共纳入阳性样本 45 例，阴性样本1295 例，试验结果显示，阳性符合率 100%(95%CI：92.13%， 100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率

　　100%(95%颁滨：99.71%，100%)。

　　针对金黄色葡萄球菌，共纳入阳性样本 40 例，阴性样本1300 例，试验结果显示，阳性符合率 100%(95%CI：91.24%， 100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对流感嗜血杆菌，共纳入阳性样本46例，阴性样本1294例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：92.29%，100%)，阴性符合率100%(95%颁滨：99.70%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.71%，100%)。

　　针对肺炎链球菌，共纳入阳性样本 61 例，阴性样本 1279例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：94.08%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对无乳链球菌，共纳入阳性样本 34 例，阴性样本 1306例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：89.85%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.71%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对脑膜炎奈瑟菌，共纳入阳性样本36例，阴性样本1304 例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：90.36%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.71%，100%)，总符合率100%(95%CI：

　　99.71%，100%)。

　　针对大肠杆菌K1，共纳入阳性样本43例，阴性样本 1297例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：91.80%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.70%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.71%，100%)。

　　针对新生隐球菌，共纳入阳性样本 88 例，阴性样本 1252例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：94.34%，99.80%)，阴性符合率 100%(95%CI：99.69%，100%)，总符合率 99.93%(95%CI：99.58%，99.99%)。

　　(二)与已上市同类产物的比对，共入组695例。

　　针对巨细胞病毒，共纳入阳性样本68例，阴性样本627例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：94.65%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.39%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对肠道病毒，共纳入阳性样本 73例，阴性样本 622例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：95.00%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.39%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对双埃可病毒，共纳入阳性样本46例，阴性样本649例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：92.29%，100%)，阴

　　性符合率100%(95%颁滨：99.41%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　针对单纯疱疹病毒滨型，共纳入阳性样本75例，阴性样本620例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：95.13%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.38%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对单纯疱疹病毒 II型，共纳入阳性样本 39例，阴性样本656例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：91.03%，100%)，阴性符合率100%(95%CI：99.42%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对水痘带状疱疹病毒，共纳入阳性样本45例，阴性样本650例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：92.13%，100%)，阴性符合率100%(95%颁滨：99.41%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　针对人疱疹病毒6型，共纳入阳性样本38例，阴性样本657例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：90.82%，100%)，阴性符合率100%(95%颁滨：99.42%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　针对流感嗜血杆菌，共纳入阳性样本44例，阴性样本651例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：91.97%，100%)，

　　阴性符合率100%(95%颁滨：99.41%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　针对肺炎链球菌，共纳入阳性样本56例，阴性样本639例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：93.58%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.40%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对无乳链球菌，共纳入阳性样本32例，阴性样本663例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：89.28%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.42%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对脑膜炎奈瑟菌，共纳入阳性样本34例，阴性样本661例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%颁滨：89.85%，100%)，阴性符合率100%(95%颁滨：99.42%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　针对大肠杆菌K1，共纳入阳性样本36例，阴性样本659例，试验结果显示，阳性符合率100%(95%CI：90.36%，100%)，阴 性符合率100%(95%CI：99.42%，100%)，总符合率100%(95%CI：99.45%，100%)。

　　针对新生隐球菌，共纳入阳性样本64例，阴性样本631例，试验结果显示，阳性符合率98.86%(95%颁滨：94.34%，99.80%)，

　　阴性符合率100%(95%颁滨：99.39%，100%)，总符合率100%(95%颁滨：99.45%，100%)。

　　(叁)与培养鉴定比较，共纳入1149例样本：

　　针对金黄色葡萄球菌，试验体外诊断试剂与培养鉴定比较的临床灵敏度为100%，临床特异度为96.86%。

　　综上所述，申报产物的临床试验资料符合技术审评要求。

四、产物受益风险判定

　　申请人对已知危险(源)进行风险评价，按照风险可接受准则判断每个危险(源)的风险是否达到可接受水平，对合理可行降低的风险、不经过风险/收益分析既判定为不可接受的风险采取控制措施，并对具体措施进行实施验证，同时重新对采取措施后的风险进行估计，确认其风险水平是否可接受。但为保证用械安全，基于对主要剩余风险的规避，需要在说明书中提示以下信息：

　　1.本产物用于体外定性检测脑脊液样本中14种中枢神经系统感染病原体核酸，包括肠道病毒、流感嗜血杆菌、肺炎链球菌、巨细胞病毒、无乳链球菌、单纯疱疹病毒 I 型、单纯疱疹病毒滨滨型、脑膜炎奈瑟菌、水痘带状疱疹病毒、双埃可病毒、新生隐球菌、人疱疹病毒 6型、大肠杆菌K1 型、金黄色葡萄球菌。

　　本产物用于中枢神经系统感染的辅助诊断。检测结果不应

　　用作诊断、治疗或其他处置决策的唯一依据。建议结合患者临床表现和其他实验室检测对病情进行综合分析。

　　2.警示及注意事项：产物说明书中介绍了该产物检验方法的局限性及使用中的注意事项。